772 反向輸出（1 / 2）
?結直腸癌（crc）是全球第三大常見癌症，平均5年總生存率（os）為60%。原發性 crc 可通過手術治愈；然而，在轉移階段，os 顯著降低。在轉移性結直腸癌（rc）中，患者接受治療性手術或圍手術期或姑息性化療和靶向治療。
?在診斷時，20%–30%的患者患有同步肝轉移（l，所有crc患者中的50%–75%會發生肝轉移，這是導致死亡的主要原因。為了提高os，我們需要進一步了解 rc 並確定其他治療靶點。雖然臨床前研究集中在原發腫瘤（tu）和轉移過程，但臨床挑戰在於轉移患者的最佳治療。此外，沒有常用的免疫活性動物模型重現 crc tu 和轉移的生長，使得我們對於了解轉移性 crc 充滿挑戰。
?腫瘤細胞在復雜的微環境中生長，涉及驅動腫瘤生長、侵襲和轉移的細胞外和細胞內信號。組織力學特性的變化既可以先於疾病發展，也可以推動疾病發展，腫瘤「硬度」與幾種腫瘤類型的預後相關。先前的研究表明，包括乳腺癌和胰腺導管腺癌在內的幾種實體瘤的疾病進展與其彈性模量相關。
?組織剛度是組織抵抗變形的程度，由應力和應變之間的關係描述。在組織水平上，剛度受細胞骨架和細胞外基質（ec的控製。纖維狀膠原蛋白是最豐富的 ec支架蛋白，對組織剛度有顯著影響。富含膠原蛋白i（col-i）的異常 ec重構已被確定為癌症進展過程中組織硬化的主要原因。作為 ec的主要來源，癌相關成纖維細胞（caf）通過表達賴氨酰氧化酶（lox）來進一步改變腫瘤機械環境，賴氨酰氧化酶是一種胺氧化酶，可啟動膠原蛋白的共價內和分子間交聯過程。在實驗模型中，通過 lox 抑製來抑製基質硬化可改善腫瘤生長並改善治療。因此，caf 被認為是限製癌症進展的有希望的治療靶點。
?腫瘤微環境在為腫瘤提供血液供應方麵也起著關鍵作用。通過使用單克隆抗體、vegf 陷阱或多靶點酪氨酸激酶抑製劑靶向血管內皮生長因子（vegf）信號通路來抑製 rc 血管生成。目前，療效不足和耐藥性限製了抗血管生成療法的益處。此外，內皮細胞（ec）根據機械環境調節其屏障能力和生長。具體而言，堅硬的基質促進 ec 增殖並可能導致血管完整性缺陷，這表明機械環境可能會影響腫瘤中的 ec 行為，從而影響抗 vegf 的功效本研究旨在闡明轉移性血管生成是否受機械微環境的影響，機械微環境可以通過 rc 中轉移相關的成纖維細胞（f）激活進行調節，以及是否可以改變這種 f 激活以提高抗血管生成治療的療效。
1、crc中的 f 高度激活
?在l觀察到 as、-c2 和 col-i 的顯著更高表達，表明 f 的肌成纖維細胞和 ec重塑特征。
?接下來，從 crc 患者的 tu(caf)和 lf)中分離出原代成纖維細胞。f 顯示出 as 和 -c2 的顯著上調，證實了肌成纖維細胞和細胞收縮性信號的增加。fas 的量化顯示 fs 中 fas 的平均麵積更大（圖l和，支持 crc fs 被高度激活。
2、晚期 crc 患者的 ec重構和硬化特征
?為了鑒定與肝轉移相關的基因表達特征，我們對 crc 患者的 tu 和 l進行了 a 測序（a-seq）。使用通路相互作用數據庫(id)對 l上調基因進行的基因集分析(gsa)揭示了整合素信號傳導的顯著富集。為了進一步表征成纖維細胞的基因表達，我們在成功富集後對分離的原代 caf 和 f進行了 a-seq。
?我們鑒定了3，721個差異表達的基因。go確定了f中上調的肌成纖維細胞/ec塑特征。確定了ec受體相互作用和fa特征和id確定了整合素信號（圖h）。此外，基因集富集分析(gsea)還揭示了差異表達基因的肌動蛋白介導的細胞收縮、fa、ec分、肌生成和血管生成特征的強烈富集（圖i-。
3、fs增加微環境硬度，支持血管生成
?我們進行了凝膠重塑分析，並觀察到f顯示出更密集、更復雜的f-肌動蛋白網絡（圖 a），並且可以比 caf 更大程度地收縮凝膠（圖b）。在新鮮和冷凍保存的組織中，我們觀察到 l的基質硬度顯著增加（圖c-d）。基質硬度與來自同一患者的樣本中的col-i、as 和 -c2 表達相關（圖e-g）。
?基質硬化調節 ec 增殖、血管生成、血管生長和分支，為了研究這種聯係，我們評估了 l中的脈管係統，並觀察了基質硬度和 cd31 血管麵積之間的相關性（圖h）。當在凝膠內培養時，允許成纖維細胞重塑基質，fs 誘導 ec 發芽的程度顯著高於cafs（圖i-k）。因此，f 支持伴隨局部 ec重塑的細胞因子產生血管生成。
4、腎素-血管緊張素係統抑製目標成纖維細胞
?對新鮮分離的 f 與肝源性成纖維細胞的 qcr 分析顯示 ras 係統的所有關鍵成分（血管緊張素原[agt]、腎素[ren]、血管緊張素轉化酶[ace]和at-1[agtr1]的表達顯著增加）。此外，fs 表達的 agt 和 agtr1 水平顯著高於cafs（圖l-o）。為了表征 ras 靶向對 f 功能的影響，我們在用氯沙坦（一種at-1阻滯劑）或卡托普利（一種ace抑製劑）治療後進行了凝膠收縮試驗。在低濃度（氯沙坦為1，卡托普利為5）和高濃度（氯沙坦為10，卡托普利為 50）時，兩者都顯著降低了 f 凝膠收縮（圖-r）。
5、ras 抑製降低轉移基質硬度並重塑微環境
?與無高血壓組和非 ras 治療組2相比，接受抗 ras 藥物治療的患者組織硬度顯著降低（圖a-b）。進一步評估（通過對同一患者組中的col-1、as 和 c2 染色）是否可以通過 f 激活的下調來解釋轉移剛度的差異。雖然高血壓與 c2 染色的增加相關，但我們沒有觀察到對as 和 col-i 的影響（圖c-h）。在所有組中，抗 ras 治療顯示 f 激活和 ec沉積顯著減少（圖c-h）。抗ras藥物的作用獨立於特定的 ras 抑製治療。觀察到轉移僵硬（不同條件±高血壓±抗ras藥物）與col-i、as和-c2表達之間呈正相關（圖i-k），表明f激活水平有助於組織僵硬在l總之，接受抗 ras 治療的患者顯示出低肌成纖維細胞/ec特征，這解釋了轉移硬化的減少。